La coccidiosi è una malattia parassitaria causata da protozoi che infettano numerose specie animali. In particolare, i coccidi che colpiscono gli avicoli fanno parte del Phylum Apicomplexa, genere Eimeria e comprendono nove specie: E. acervulina, E. brunetti, E. hagani, E. maxima, E. mitis, E. mivati, E. necatrix, E. preacox e E. tenella.

La coccidiosi in allevamento è praticamente impossibile da eliminare, in quanto è ubiquitaria,  possiede un’elevata diffusione ambientale ed un alto grado di resistenza alle diverse condizioni atmosferiche e ai disinfettanti. I coccidi, una volta ingeriti, si sviluppano e moltiplicano rapidamente all’interno delle cellule epiteliali del tratto intestinale per poi essere nuovamente espulsi sotto forma di oocisti, che infettano altri animali e l’ambiente circostante.

La gravità della malattia può essere influenzata da diversi fattori tra cui il parassita e il genotipo dell’ospite, la numerosità e l’età della dose di oocisti, il sistema di gestione del pollame, il livello significativo di oocisti sporulate e la precedente storia di esposizione (Blake, 2015).

La coccidiosi è tipica degli allevamenti ad alto indice di affollamento ambientale, come i moderni allevamenti avicoli intensivi, in particolare quelli a terra (Asdrubali et al., 1996). Gli animali più colpiti sono i soggetti giovani: dopo il primo contatto essi sviluppano un’immunità e rimangono protetti contro ulteriori infezioni. La prevenzione e il controllo di questa patologia parassitaria si deve basare innanzitutto su una corretta gestione dell’allevamento, seguendo le norme di biosicurezza e i vuoti sanitari. Altri metodi per prevenire la coccidiosi sono l’utilizzo di molecole anticoccidiche, che possono essere coccidiostatici o coccidiocidi, con una somministrazione continua o di breve durata oppure si può ricorre alla vaccinazione. Particolare attenzione va riservata alla profilassi anticoccidica nelle pollastre leggere dato che è vietata la somministrazione di molecole anticoccidiche alle galline ovaiole in produzione.

Lo scopo di questo lavoro  è stato quello di valutare la prevenzione della coccidiosi attuata in un allevamento di pollastre leggere utilizzando due diversi approcci: terapia di 2 giorni con una molecola anticoccidica confrontata con la vaccinazione.

Mycoplasma gallisepticum (MG) è considerato un importante patogeno respiratorio della specie pollo, tacchino e delle specie avicole definite minori. Nel pollo è responsabile della CRD (Chronic Respiratory Disease) e nel tacchino della Sinusite Infraorbitale Infettiva. Nella gallina ovaiola è responsabile di forme respiratorie, che possono essere associate, in funzione della patogenicità del ceppo, anche a importanti seppur temporanei cali della ovodeposizione. Come per altri micoplasmi aviari la trasmissione può avvenire per via orizzontale (tramite contatto diretto od indiretto) e per via verticale, ed una volta instaurata l’infezione, la malattia ha la tendenza alla cronicizzazione. In corso di infezione gli indici di morbilità sono elevati mentre gli indici di mortalità possono essere variabili (in funzione dell’età dei soggetti e della copresenza di altri agenti infettivi virali o batterici o a specifiche condizioni ambientali, quali elevata densità animale, ventilazione, qualità della lettiera). L’impatto economico è nella maggior parte dei casi associato ad un aumento degli scarti al macello principalmente per le infezioni secondarie alla micoplasmosi (in primis E. coli), inoltre gli animali affetti possono presentare un calo del consumo di alimento e un peggioramento dell’indice di conversione alimentare. Ulteriori costi sono relativi al contenimento della forma clinica da MG o a quelli legati all’insorgenza di infezioni batteriche secondarie (E.coli, Ornithobacterium rhinotrachealis, Riemerella spp., etc.). Consci del suo importante ruolo patogeno e delle conseguenti perdite economiche, il controllo di questo patogeno è sempre stato di primaria importanza nei vari settori produttivi industriali e nello specifico nel settore da riproduzione mediante la costituzione ed il mantenimento di gruppi MG-free. Tale pratica gestionale ha sempre rappresentato un punto cardine nella strategia di controllo di questo patogeno e degli altri micoplasmi importanti per l’industria avicola, inoltre l’attuazione di specifici piani nazionali di controllo ed eradicazione nei confronti di MG hanno portato ad una notevole diminuzione della sua prevalenza in diversi paesi europei o extraeuropei. In recenti pubblicazioni da parte di autori appartenenti al continente africano ed asiatico si evince invece come il Mycoplasma gallisepticum rappresenti ancora un importante patogeno ad elevato impatto economico-sociale. La strategia di controllo delle micoplasmosi respiratorie può includere, in funzione della situazione epidemiologica e della realtà produttiva o di altri fattori di natura commerciale, la messa in atto di una o più azioni (eradicazione-depopolamento, compartimentalizzazione, biosicurezza, profilassi indiretta-vaccinazione e terapia antibiotica mirata). Data l’importante forma clinica che si può sviluppare nel gruppo affetto e la possibilità di insorgenza di infezioni secondarie, il trattamento antibiotico per MG può essere considerato una prassi consolidata specialmente nel settore da carne. Trovandoci di fronte ad una puntuale e corretta richiesta di un uso razionale del farmaco da parte delle istituzioni nazionali e comunitarie, per il Medico Veterinario risulta di fondamentale importanza conoscere la sensibilità in vitro agli antimicrobici dei ceppi patogeni circolanti. Tale approccio è volto a garantire il successo terapeutico e benessere animale nel gruppo affetto, evitare l’utilizzo di farmaci considerati non efficaci sulla base dei risultati degli studi in vitro o nello specifico non operare ulteriori pressioni selettive per farmaci o classi di antibiotici che presentano evidenza di diminuita suscettibilità nel tempo e soprattutto per quelli antibiotici considerati “critically important”. A tal ine, per avere una stima della sensibilità o della resistenza di un determinato microrganismo agli antimicrobici, si può utilizzare il calcolo della M.I.C. (Minima Concentrazione Inibente), poiché considerata dalla comunità scientiica il gold-standard tra gli ASTs (Antimicrobial Susceptibility Tests). Inoltre tale metodica è l’unico AST applicabile a microrganismi fastidiosi come i micoplasmi. Il laboratorio di medicina aviare effettua lo studio di MIC in micoplasmi aviari e di altri settori zootecnici dal 2010, ciò ha consentito l’istituzione di un database interno la cui valutazione ha consentito di evidenziare presenza/assenza di efficacia per determinate molecole antibiotiche e di valutare nel tempo eventuali fluttuazioni della sensibilità dei ceppi circolanti nei confronti di specifici antibiotici o classi di antibiotici. Ne consegue che tale test laboratoristico possa rappresentare un’utile risorsa a supporto delle attività professionali del veterinario di campo. Lo scopo del presente lavoro è quello di condividere l’applicazione di uno strumento dinamico come la M.I.C. per la valutazione e il monitoraggio della antibiotico sensibilità di ceppi patogeni dell’industria avicola italiana e nello specifico di Mycoplasma gallisepticum.

Le infezioni parassitarie esercitano una forte pressione di selezione nei confronti dei loro ospiti e sono responsabili delle dinamiche coevolutive dei meccanismi di difesa dell’ospite e dell’adattamento del parassita a questi (Dieckmann 2002).

Numerosi studi, europei e mondiali, riguardanti la ricerca di emoparassiti nell’avifauna selvatica e no (Al-Barwari and Saeed 2012), hanno riportato che oltre il 50% delle diverse specie di uccelli esaminati risulta infetto; gli emoparassiti più frequentemente ricercati e studiati appartengono ai tre generi Plasmodium, Haemoproteus e Leucocytozoon, (Atkinson and van Riper 1991) tutti trasmessi mediante la puntura di insetti ematofagi vettori. Clinicamente, negli uccelli selvatici, tali infezioni possono risultare inapparenti o presentarsi con sintomi blandi quali inappetenza, dimagrimento e debolezza, che possono essere riscontrati più frequentemente negli animali giovani (Ozmen and Haligur 2005; Zhang et al. 2014). Inoltre, è importante tener conto del fatto che molto spesso tali ospiti sono infettati simultaneamente da diverse specie di parassiti e che proprio queste coinfezioni sono tra le maggiori cause dell’evoluzione della virulenza (Arriero and Moller 2008).

Per quanto concerne l’Italia, gli unici dati disponibili sull’argomento sono stati riportati in due recenti lavori dell’Università di Torino che riportano la prevalenza di questi generi di emoparassiti in piccioni e cornacchie grigie abbattuti nella suddetta provincia (Scaglione et al. 2015; Scaglione et al. 2016).

Nel nostro studio, per la prima volta, abbiamo osservato la distribuzione e la prevalenza di Haemoproteus spp./Plasmodium spp. e Leucocytozoon spp. in columbidi e corvidi rinvenuti sul territorio della provincia di Forlì- Cesena nell’ambito del Piano di Monitoraggio Sanitario della fauna selvatica in Emilia Romagna.

La Bronchite Infettiva aviare (IB) è una malattia virale diffusa in tutto il mondo, secondaria come impatto economico per l’industria avicola solamente all’inluenza aviaria. E’ caratterizzata da alta morbilità e capacità di trasmettersi rapidamente tra allevamenti diversi.

Il virus della Bronchite Infettiva è un coronavirus e, come tutti i virus a RNA, presenta un alto grado di diversità̀ genetica che deriva da un’alta frequenza di mutazioni e ricombinazioni che danno vita a differenti genotipi virali con caratteristiche patogenetiche e biologiche differenti.

Il genoma dei coronavirus è il più̀ grande genoma non-segmentato tra i virus a RNA attualmente conosciuti ed è costituito da un singolo ilamento di RNA lineare, approssimativamente di 27.5-28 Kbp di lunghezza, a polarità̀ positiva (ssRNA+) che, combinandosi con il capside, forma un nucleocapside a simmetria elicoidale. Il genoma è suddivisibile in open reading frame (ORF) che hanno il compito di codiicare un complesso di proteine strutturali (per esempio S, E, M, N) e non-strutturali (per esempio NSPs 2–16, 3a, 3b, 5a, 5b). La glicoproteina S è costituita da una serie ordinata di due subunità: l’estremità N-terminale (S1 di 520 amminoacidi) che svolge una funzione di legame al recettore cellulare e l’estremità̀ C-terminale (S2 di 625 amminoacidi) che permette la fusione con la membrana e il rilascio del virus nel citoplasma.

Come prevedibile, in funzione del suo ruolo biologico e della posizione nella struttura virale, questa proteina rappresenta anche il principale target della risposta immunitaria sia umorale che cellulo-mediata. Rappresenta infatti il principale epitopo immunostimolante e neutralizzante. Questa alta pressione selettiva giustiica l’estrema variabilità̀ della proteina S. Per classiicare il virus della Bronchite Infettiva sono stati proposti vari metodi: i più̀ comuni prendono in considerazione il sierotipo e il genotipo.

– Classiicazione in sierotipi: tradizionalmente i sierotipi sono stati identiicati per mezzo test di neutralizzazione su uova embrionate di pollo o di inibizione dell’emoagglutinazione (HI).

– Classiicazione in genotipi: per la classiicazione si utilizza la tecnica della reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) al ine di ampliicare il gene S o una parte di essa, che viene successivamente sequenziata.

Questo lavoro si propone di fornire una sintesi delle criticità della diagnostica molecolare per l’IB e fornire alcuni suggerimenti per un corretto approccio diagnostico.

Mycoplasma synoviae (MS) è una delle specie di micoplasmi considerate rilevanti per il comparto avicolo industriale, poiché la sua presenza può contribuire a determinare importanti ripercussioni in termini produttivi. Nel settore della gallina ovaiola, negli ultimi anni tale microrganismo è stato oggetto di particolare attenzione a causa delle anormalità del guscio ad esso correlate (Catania et al., 2010, 2016; Feberwee et al., 2009). Recentemente, Catania e collaboratori (2016) hanno dimostrato, mediante infezione sperimentale, che non tutti i ceppi di MS possono produrre le tipiche lesioni apicali del guscio e che, anche in assenza di lesioni apicali, l’infezione da MS determina una diminuzione del numero delle uova deposte e del loro peso medio, concludendo quindi che l’impatto di MS in tale settore non deve essere solamente correlato alle caratteristiche anomalie.

Sempre nella gallina ovaiola ed in particolare nella fase pollastra, una forma di artrite, deinita amiloide, è stata riportata in nord Europa in cui Enterococcus fecalis e Mycoplasma synoviae erano considerati attori o co-attori della lesione (Landmann & Feberwee, 2001). E’ opportuno precisare che tali lesioni sono state evidenziate anche nel territorio italiano e sulla base della nostra esperienza risultano principalmente correlate ad una infezione da enterococco, dato che i metodi diagnostici in nostro possesso non hanno evidenziato la presenza di MS. Basandoci sia su infezioni sperimentali, sia sull’esperienza di campo possiamo immaginare che la copresenza dei due patogeni possa determinare un aggravamento della situazione clinica, visto che in particolare il Mycoplasma synoviae manifesta il suo potere patogeno in maniera più evidente se in coinfezione (Feberwee et al., 2009; Moronato et al., 2016).

Scopo del presente lavoro è quello di condividere un recente caso clinico in un allevamento di pollastre risultato positivo a MS, dove si è potuta notare un’importante manifestazione clinica con conseguente impatto zootecnico e notevoli perdite economiche solamente in un capannone, mentre nei due rimanenti, seppur in presenza del Mycoplasma synoviae, le manifestazioni cliniche sono state poco evidenti o addirittura trascurabili, così come le perdite economiche ad esso correlate.

Quindi, al ine di veriicare o almeno cercare di chiarire il motivo di tali differenze in termini di risposta clinica/produttiva tra i tre capannoni oggetto di studio, si è deciso di applicare accertamenti diagnostici addizionali.

E’ noto da tempo come i  Campylobacter termotolleranti isolati dall’uomo e dal pollame siano resistenti alla maggior parte di antimicrobici inclusi nella famiglia  dei beta-lattamici , quali amoxicillina, ampicillina e ticarcillina(Lachance et al., 1991). Tale resistenza è messa in correlazione perlopiù con la presenza di β-lattamasi., presente nella quasi totalità di isolati di C.jejuni (83-92%) (Tajada et al., 1996). Il ruolo di questo enzima, comunque, nel determinismo dei fenomeni di resistenza appare spesso controverso. Fliegelman et al. (1985) hanno dimostrato che in alcuni casi la maggior parte di isolati di C.jejuni positivi al test nitrocein per la presenza di β-lattamasi risultava sensibile all’azione dell’ampicillina facendo presupporre  l’implicazione di meccanismi diversi nel determinismo della resistenza . Il gene responsabile della produzione di β-lattamasi, designato come bla(OXA-61) (Alfredson et al., 2005) mostra identità con i geni bla(OXA-61) di Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii (Griggs et al.2009). Gli inibitori di β-lattamasi più conosciuti sono l’acido clavulanico, seguito dai composti sintetici sulbactam e tazobactam (Gaudreau et al., 1987). Obbiettivi del presente lavoro sono stati quelli di determinare fenotipicamente la suscettibilità ai beta- lattamici di ceppi di C.coli e C.jejuni isolati in allevamento e di valutare la presenza del gene bla(OXA-61) da un punto di vista qualitativo e quantitativo in relazione alla produzione di β-lattamasi. Inine è stata messa in evidenza la presenza di una eventuale correlazione tra l’espressione del gene bla(OXA-61) e l’azione di sulbactam e acido clavulanico come inibitori.

Riemerella anatipestifer (RA) è considerato un importante patogeno per gli allevamenti avicoli mondiali. Storicamente l’infezione è associata a polisierositi e setticemie che colpiscono prevalentemente gli anatidi di 1-8 settimane di vita (5).

In Italia i primi focolai di riemerellosi sono stati descritti in tacchini e polli da carne alla fine degli anni 70. In questi episodi la sintomatologia era prevalentemente nervosa e, nel tacchino, era sporadicamente accompagnata ad oftalmiti bilaterali (4,6). Dopo quelle prime segnalazioni la malattia ha continuato ad essere presente negli allevamenti italiani di tacchini da carne con andamento altalenante, mentre nel pollo veniva segnalata nuovamente solo a partire dal 2012, in associazione ad importanti quadri meningoencefalici (1). Il contenimento della malattia è affidato a trattamenti profilattici o terapeutici. Quelli profilattici sono basati sull’impiego di vaccini batterici inattivati la cui efficacia dipende dalla variabilità antigenica dei ceppi circolanti (sierotipi), mentre il trattamento con antimicrobici viene attuato in presenza di sintomatologia clinica. In letteratura sono disponibili poche informazioni riguardo alla sensibilità agli antimicrobici di RA, e riguardano per lo più  ceppi isolati da anatidi in paesi extraeuropei (2, 8).Con il presente studio si è voluto indagare l’efficacia in vitro di alcuni antimicrobici nei confronti di ceppi clinici di Riemerella anatipestifer isolati da broiler e tacchini da carne in Italia.

La Bronchite Infettiva è uno dei problemi economico-sanitari più rilevanti nel comparto avicolo, mondiale (MaloA et al., 1988,De Wit et al., 2011) e italiano (Beato et al., 2005). Dal primo isolamento negli anni ‘30 (Jackwood, 2012) del virus della Bronchite Infettiva (IBV), un gammacoronavirus, ne sono state identificate in tutto il mondo più di 50 varianti (Valastro et al., 2016), con un grado di identità aminoacidica che oscilla dal 75 all’80% (Cavanagh, 2007). Per il controllo di questa patologia si è da subito fatto ricorso alla vaccinazione, appurando però l’inadeguatezza di un protocollo vaccinale basato sull’utilizzo di un solo ceppo di IBV al fine di generare una sufficiente immunizzazione nei confronti delle tante varianti di campo circolanti (Cook et al., 1999). Studi di cross-protezione hanno rivelato come l’associazione di due ceppi vaccinali eterologhi, in due diverse somministrazioni (Terregino et al., 2008) (priming e boosting, generalmente a 1 e 14 giorni di vita), o in singola somministrazione ad un giorno di vita (Jones et al., 2005,Awad et al., 2016), sia più efficace nella protezione contro ceppi circolanti, eterologhi e omologhi a quelli vaccinali.

Questa tipologia di protocollo vaccinale è ampiamente adottata e sfrutta il concetto di “protettotipo” (Raj and Jones, 1996,Cook et al., 1999), quindi la cross-protezione indotta dall’insieme di ceppi antigenicamente dominanti (De Wit, 2000,Terregino et al., 2008). Ragionevolmente, la scelta del protocollo vaccinale e dei ceppi da utilizzare dovrebbe essere basata su evidenze epidemiologiche legate al territorio (Bande et al., 2015). In Italia, i genotipi più frequentemente riscontrati sono il QX, in aumento negli ultimi anni (Franzo et al., 2014), i ceppi Mass-like e 793B, la cui persistenza è imputabile alla vaccinazione (Franzo et al., 2014) e il Q1, identificato per la prima volta in Italia nel 2011 (Toffan et al., 2011). In minor misura sono stati identificati anche i genotipi D274 e IT-02, presente dal 1999 (Dolz et al., 2006) al 2010 (Taddei et al., 2011) ma non più identificato (Franzo et al., 2014).

Ad esacerbare le problematiche respiratorie nel broiler contribuisce anche la crescente diffusione del Metapneumovirus aviare (aMPV), riscontrato soprattutto in animali sintomatici a fine ciclo produttivo (Cecchinato et al., 2013a). La comparsa tardiva di questo patogeno ha suggerito un possibile ruolo di competitors dei ceppi vaccinali e/o di campo di IBV nell’ostacolarne la replicazione (Cavanagh et al., 1999), per quanto situazioni di coinfezione non siano infrequenti.

Questo studio nasce quindi dall’esigenza di verificare e monitorare la presenza dei vaccini somministrati ad inizio ciclo produttivo, per valutare la corretta applicazione e l’efficacia del vaccino medesimo, in termini di replicazione, persistenza e “convivenza” con altri ceppi, vaccinali o di campo. La disponibilità di una visione dell’andamento nel tempo dei titoli virali dei vaccini somministrati ha stimolato curiosità riguardo all’interazione dei due vaccini, alla correlazione dei titoli virali, al legame tra i titoli e l’età degli animali e al ruolo del titolo vaccinale nel prevenire o predisporre l’ingresso di ceppi di campo o di altri patogeni di sempre più frequente riscontro, come aMPV.